采用Jspecies软件分析芽孢杆菌全基因组之间平均核苷酸同源性(ANI)的特征性。结果表明,芽孢杆菌属间、种间及亚种间两两菌株间ANI与其分类地位相关,具有明显属种特异性,其中芽孢杆菌科不同属之间的ANI值分布于50%~65%;芽孢杆菌种间ANI值均低于95%,分布范围为65%~90%,加权平均数为70.12%,其中90%的ANI值低于70%;芽孢杆菌亚种间ANI值分布主要范围为90%~96%,占90%。因此,芽胞杆菌属间的ANI鉴定标准建议定为50%~65%,芽胞杆菌种间的ANI鉴定标准建议定为65%~90%,芽胞杆菌亚种间的ANI鉴定标准建议定为90%~96%。同时,基因组中的四核苷酸(Tetra)回归系数与ANI值具有相关性,表现明显属种特征性,回归拟合显示两者呈现一元二次方程关系,y=271-573.58x+399.65x²(R²=0.981 2),同时高于70%的ANI值与相应的Tetra回归系数呈线性正相关,方程式为y=178.58x-81.521(R²=0.876 7)。

为构建嗜水气单胞菌的DNA疫苗载体,根据已发表的该菌外膜蛋白基因momp的核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR技术,扩增到嗜水气单胞菌L316的主要外膜蛋白基因,并插入到真核表达载体pcDNA3上,构建成DNA疫苗,命名为pcDNA3-POMP。以纯化的原核表达蛋白GST-POMP免疫SD大鼠制备抗血清,用ELISA测定抗体效价达到1:100 000以上;用pcDNA3-POMP质粒转染293细胞,转染48 h后收集细胞,提取细胞的RNA进行RT-PCR,检测到外源基因的表达。至此,初步完成嗜水气单胞菌DNA疫苗表达载体的构建,为进一步疫苗免疫和效价的检测奠定基础。

以三明显性核不育为载体,以75-1-127为Pi-9基因的供体亲本,利用分子标记辅助方法通过连续回交把抗稻瘟病基因Pi-9导入受体亲本双抗明占中。对BC₄F₃代可育株进行筛选,获得含有纯合Pi-9基因株系HP304。通过水稻DNA指纹图谱鉴定,其遗传背景与双抗明占一致,主要农艺性状与双抗明占没有显著差异;田间自然诱发稻瘟病抗性明显优于双抗明占。实践证明,利用三明显性核不育水稻转导抗稻瘟病Pi-9基因具有可行性。

采用RT-PCR技术从蝴蝶兰‘满天红’花瓣中克隆获得花青素苷生物合成途径中CHS、DFR、F3'5'H和ANS等4个关键酶基因的保守序列,长度分别为302、275、285和285 bp。序列分析表明:4个关键酶蛋白与石斛兰、大花蕙兰等其他植物来源的花青素苷生物合成相关蛋白均具有较高的同源性,分别为81%~95%、67%~91%、68%~92%和83%~89%。系统进化分析表明4个关键酶基因的系统进化基本上符合植物分类学分类。实时荧光定量PCR检测结果表明,CHS和F3'5'H基因在大花蕾期及始花期的表达量最高,盛花期表达量降低;在花瓣、唇瓣中的表达量大于萼片,在叶片、根中仅有微量表达。

制备嗜水气单胞菌MOMP-ISCOMs疫苗,使用该疫苗口服和注射免疫欧洲鳗鲡, 分别于口服或注射免疫后第14、28 d分离欧洲鳗鲡的皮肤和肾脏细胞,使用ELISPOT技术分析其中抗体分泌细胞ASC的数量变化。结果显示: 2种免疫方式均能不同程度增加皮肤和肾脏中免疫细胞的数量; 其中口服免疫组非特异性免疫细胞数量增加速度较快,注射免疫组特异性免疫细胞数量增加更多。

【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为64.81%,P1感染率为12.96%,TTV1感染率为33.33%,TTV2感染率为51.85%,其中8份样品表现为PCV2和P1的混合感染,42份样品表现为PCV2和TTV的混合感染,4份样品表现为PCV2、P1和TTV的混合感染,分别占样品总数的7.41%、38.89%和3.7%。【结论】猪群中PCV2和TTV的感染比较普遍,P1的感染率较低, PCV2和TTV的混合感染率较高,混合感染种类复杂,加重了疫病防控的难度。

应用微量交叉中和试验(NT)和胶乳凝集抑制试验(LPAI)比较番鸭细小病毒、鹅细小病毒和番鸭源鹅细小病毒之间的抗原相关性。结果显示:3种病毒与同源抗血清的中和效价和LPAI效价均明显高于异源血清;番鸭细小病毒与番鸭源鹅细小病毒、鹅细小病毒之间的R值均小于0.1;番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒的R值大于0.25。结果表明番鸭细小病毒与鹅细小病毒(番鸭源或鹅源)的抗原相关性较低,提示番鸭源鹅细小病毒与鹅细小病毒属于同一血清型的不同亚型。

为分析水稻育性微效恢复基因的表型遗传,以套袋自交结实率、嵌合颖花率和黑染花粉率为指标考查野败型(WA)不育系珍汕97A、龙特浦A和京福1A的育性在3个转育高世代中的表现。研究结果:黑染花粉粒的出现与微效恢复基因有关,导致不育系自交结实,从而产生杂株;采取遗传提纯等方法可以排除部分微效恢复基因,达到提纯和去杂的目的,若要完全将其排除,在理论和实践上是不可能的;嵌合颖花率适合作为微效恢复基因遗传分析的量化指标,为进一步研究其分子遗传提供基础。

以90份山药种质资源为材料,从多态性检测水平、遗传多样性检测水平、遗传距离分析和聚类分析4个方面对ISSR与SRAP揭示山药种质资源遗传多样性的差异进行分析。结果表明:SRAP标记的扩增谱带总数、平均扩增谱带数、平均多态性谱带数都远高于ISSR标记,遗传距离范围也比ISSR标记更广,但多态性比率差异不大;2种标记在检测遗传多样性和种群间的分化程度方面较为相似,二者结果均表明山药种质资源总的遗传变异中约有52%变异存在于种群间,约48%的变异存在于种群内;从聚类分析的结果上看,ISSR标记在以遗传距离为0.13时将山药资源分为4个类群,而SRAP标记以遗传距离为0.18时将其分为5个类群。综合4个方面比较结果及SRAP标记和ISSR标记自身的特点,认为SRAP标记更适合用于山药遗传多样性分析。

介绍一种简单快捷的水稻不同组织总蛋白提取方法。该方法采用预冷甲醇和丙酮依次洗涤去除杂质和次生代谢干扰物,同时在甲醇洗涤步骤中加入蛋白酶抑制剂混合液,能够最大限度地包含所有蛋白质并降低蛋白酶的降解作用,提高蛋白质的质量和产量。采用该方法从水稻的根、茎、叶及发育中的种子中提取粗蛋白,产量为20~99 mg·g^-1FW,提取蛋白整个过程耗时1.6 h。 以SDS-PAGE胶及Western Blot检测所提总蛋白的质量,分别用核蛋白、胞浆蛋白、膜蛋白以及淀粉结合型蛋白等不同类型蛋白抗体进行Western Blot检验。结果显示采用该方法所分离的总蛋白质量可以满足水稻不同类型蛋白对Western Blot的质量要求。

分别采用苯酚硫酸法和硝酸铝显色法测定仙草多糖和总黄酮,结合仙草产量测定,综合得到了仙草多糖总量和总黄酮总量的动态变化,确定8月下旬为仙草的最佳采收期,此时仙草的单株产量为240 g·株^-1,折合产量9 000 kg·hm^-2,多糖含量1.96%,总黄酮含量13.83%。

为研究三月红荔枝果皮着色与果肉变甜不同步的原因,以三月红和白糖罂荔枝果实为试材进行果皮着色动态差异的比较研究。果皮a值观测结果表明三月红荔枝果皮迅速转红主要发生在果皮全红前13 d内,而白糖罂荔枝果皮迅速转红发生在果皮全红前7 d内;果皮h值观测结果表明三月红荔枝果皮着色主要发生在果皮全红前10 d内,而白糖罂荔枝果皮迅速转红主要发生在果皮全红前11 d内;三月红荔枝果肉的糖酸比在4月22日达到最大值;白糖罂荔枝果肉的糖酸比在5月16日达到并此后维持最大值;可见,三月红荔枝果皮着色与果肉变甜发育是不同步的,前者晚约6 d,主要原因是三月红荔枝果肉糖酸比最高时的果皮花色素苷含量较低;而白糖罂荔枝果皮着色与果肉变甜发育是同步的。2个荔枝品种果皮在着色过程中果皮花色素苷含量总体上呈上升趋势,果皮叶绿素含量总体上呈下降趋势;2品种果皮a和h值分别与果皮花色苷含量呈显著的线性正和负相关关系;三月红荔枝果皮全红时的果肉可滴定酸含量升高导致果肉风味变酸。

以文心兰‘小樱桃’花梗腋芽诱导出的丛生芽为增殖培养材料,采用正交设计法,研究基本培养基、6-BA、NAA和水解乳蛋白(LH) 4种因素对文心兰丛生芽增殖的影响,以期筛选出各因子的最佳水平,建立文心兰‘小樱桃’丛生芽增殖培养体系。结果表明:各试验因素对文心兰丛生芽增殖影响的主次关系为6-BA >基本培养基>NAA >LH;筛选出文心兰丛生芽增殖的最佳培养基配方为改良1号+ 6-BA 3.0 mg·L^-1 + NAA 0.1 mg·L^-1 +LH 0.5 g·L^-1,45 d平均增殖系数达6.53,有效提高了繁殖效率,为其种苗工程化育苗提供了技术基础。

以采自福建省山区的正红菇Russula griseocarnosa为研究材料,进行ITS(internal transcribed spacer)、RPB2(the second largest subunit of the nuclear RNA polymerase enzyme Ⅱ)保守区段克隆测序和序列同源性比对。将从GenBank中获得的部分红菇属物种ITS和RPB2序列与正红菇序列通过最大简约法进行系统发育分析。基于ITS序列构建的系统发育树表明,福建正红菇与云南大红菌Russula griseocarnosa X.H. Wang,Zhu L. Yang & Knudsen,sp.nov.间序列差异较小,亲缘关系较近,以99%的支持率聚为一簇。福建正红菇与欧洲红菇Russula vinosa及玫瑰红菇Russula rosea间序列差异较大,亲缘关系较远,在系统发育树上聚为不同分枝。基于RPB2序列构建的系统发育树也表明福建正红菇与云南大红菌聚为一簇(支持率94%),而与玫瑰红菇聚为不同分支。

采用液体培养技术,通过分析培养基质中的营养水平动态变化,以期明确添加一定量油茶枝提取液的液体培养基对茶薪菇菌丝生长量、菌丝营养生长的碳、氮代谢及酚类物代谢的影响。以未添加油茶枝的麦麸-土豆培养基为对照,结果显示:两组生物量和培养液营养基质的动态变化基本相同,添加8%油茶枝提取液,可明显提高培养液中总酚含量作为营养基础,但并未影响茶薪菇菌丝体对液体培养基质碳氮源及酚类物的代谢利用。

黄曲霉Aspergillus flavus是一种广泛存在的致病真菌,早期准确检测黄曲霉并加以控制是减少黄曲霉毒素产生的有效措施。本研究利用真菌通用引物ITS1/ITS4扩增黄曲霉转录间隔区并进行克隆测序,通过序列比对,设计1对黄曲霉特异性引物S1/X2,由此建立的PCR检测体系对包括黄曲霉在内的5种曲霉菌及其他17种不同的真菌、细菌基因组DNA进行扩增,结果只有不同来源的黄曲霉菌株能扩增出334 bp的特异性条带,而其余参试菌株均无扩增产物,其检测灵敏度在DNA水平上可达到280 fg。该检测体系能从自然发病的花生或玉米组织中扩增到334 bp的特异片段,实现对黄曲霉的快速可靠检测。

以假单胞菌Pseudomnas aeruginosa 、绿色木霉Trichoderma viede为供试食用菌病原菌,评价海头红提取物的抑菌活性,并采用生物活性追踪法对其中抑菌有效成分进行初步分离。结果表明,海头红乙醇提取物经萃取分离得到的石油醚萃取相、氯仿萃取相、乙酸乙酯萃取相中,氯仿萃取相和乙酸乙酯萃取相对假单胞菌具有较好的抑制作用,100 mg·mL^-1浓度下抑菌圈直径分别为14.3 mm和8 mm;石油醚和氯仿萃取相对绿色木霉的菌丝生长的抑制作用较好,72 h抑制率分别达54.57%和36.55%。对乙酸乙酯组分通过2次硅胶柱层析分离,得到一个具有抑菌活性的组分D,其对假单胞菌的抑菌圈为13 mm(100 mg·mL^-1),对绿色木霉的菌丝生长72h抑制率为48.53%(50 mg·mL^-1)。对组分D进行GC-MS分析,初步判定其中抑菌有效成分为4-羟基苯甲醛,有关其抑菌有效成分的纯化与鉴定有待进一步研究。

为研究冬季生物过滤除臭设备对畜禽养殖舍在冬季散发出的恶臭气体去除效果,概述冬季畜禽养殖舍除臭工艺以及该设备的结构和工作原理,确定关键部件结构设计和参数计算。实际应用结果表明:在活性滤料配方草腐土70%、珍珠岩20%、黑炭10%,滤层高度950 mm,滤床表面负荷30.0 m³·m^-2·h^-1,滤料湿度控制范围为(52±3)%情况下,舍内生物过滤除臭设备持续运行6 h,猪舍内NH₃浓度可以控制在10.0 mg·m^-3以内,除臭效果明显,也不与舍外空气交换,不会对舍内温度产生任何影响。

以南方山地小流域为研究对象,在福州北峰开展以优质牧草为纽带的循环农业模式研究。为了评价该模式的可持续发展程度和经济效益,本文采用能值分析方法进行分析,结果表明,该循环农业模式对自然资源的利用程度高,能值自给率达11.23%;系统自产资源投入占总能值投入的34.25%,能值反馈率高达62.83%,表明该系统对外界购买能值的依赖程度低,自组织能力强;净能值产出率为1.69,环境负载率仅0.49,可持续发展指数为3.47,该循环农业模式是一种资源节约型、环境友好型、具有较高生产效率的农业生产模式,可在我国南方丘陵山地推广。

水稻是世界上最重要的粮食作物之一,也是单子叶植物分子生物学研究的模式植物。稻穗(即花序)的生殖发育直接影响到稻谷的产量和稻米的品质,因此研究水稻花器官的形成无论在发育生物学还是在遗传育种上都具有重要的理论意义和实际应用价值。本文介绍了当前花器官研究状况,从簇生穗的性状,形成机制及遗传学分析等方面的出发,阐述了簇生穗基因的研究进展,并展望基因在未来水稻遗传育种中的应用。